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上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

白细胞介素-4的实验原理及样本处理

点击次数:232 发布时间:2021-12-23
  白细胞介素-4是趋化因子家族的一种细胞因子。白细胞介素是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子。由于是白细胞产生又在白细胞间发挥作用,所以由此得名,现仍一直沿用。由白细胞产生又在白细胞间起调节作用的细胞因子。现在是指一类分子结构和生物学功能已基本明确,具有重要调节作用而统一命名的细胞因子,它和血细胞生长因子同属细胞因子。两者相互协调,相互作用,共同完成造血和免疫调节功能。白细胞介素在传递信息,激活与调节免疫细胞,介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。
 
  现将工作原理公布如下: 采用双抗体夹心法测定大鼠白细胞介素 4(IL-4)水平。用纯化的大鼠白细胞介素 4(IL-4)抗体包被微孔板,制成固相载体,实验时依次在微孔板中加入样本及标准品,并加入 HRP 标记的白细胞介素 4(IL-4)抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,反复洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。颜色的深浅和样品中的 IL-4 含量呈正相关。采用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度(OD 值),根据标准曲线,计算测试样品中白细胞介素 4(IL-4)浓度。
 
白细胞介素
       白细胞介素-4样品收集、处理及保存:
 
  1、细胞培养上清:适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液,以1000×g离心15分钟,收集上清。
 
  2、细胞:用PBS反复洗涤细胞3次,调整细胞浓度达到104-106/ml 左右,通过反复冻融,使细胞破坏并放出细胞内成份,或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。
 
  3、 血清:在室温下,血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。
 
  4、血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置10-20 分钟后,1000×g离心15分钟,收集上清。
 
  5、体液:包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集,以1000×g离心15分钟,收集上清。
 
  6、组织标本:切取组织标本,称取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或匀浆器,或超声破碎仪将标本匀浆,以2000-3000rmp离心20 分钟,收集上清进行检测。
 
  7、样品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
 
  8、保存:如果样品不能立即检测,应将其分装,-70 ℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
 
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