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上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

ELISA试剂盒实验的注意事项

点击次数:236 发布时间:2021-11-19
  我们在做ELISA试剂盒实验的时候有哪些需要注意的事项呢?今天上海纪宁生物为大家罗列了几个比较常见的事项,需要能让大家尽量避免误区,
 
  一、包被
 
  1、将包被抗原用包被缓冲液配制包被液,每孔取100 mL加入酶标板,盖好盖板膜,包被条件如下表,4℃ 16-20h包被时酶标板可以叠放,而37℃ 2h包被时酶标板之间的间距应保持一致(一般为5cm)。根据培养箱的设计调节酶标板间的间距,如培养箱从底部产热,则应增加下层酶标板间的间距为10cm 。
 
  2、包被加样采取吸二打一的方式,应避免加在孔壁上部,若不慎滴加在孔壁上,根据该滴溶液是否应加入孔内再做判断,若应加入,则小心振荡使其落入孔底,反之则用吸水纸小心吸出,并注意不可溅出,不可产生气泡。
 
  3、包被前预吸查看枪头是否合格,水流是否一致,不一致者应更换枪头,包被应采用枪头,每包被一块板,应将枪头套紧,并且在包被的过程中要注意查看吸液是否一致,在包被过程中若出现任何小问题,都应将此块板做出记号,以便后期组装入库时淘汰。
 
  4、若采用37℃ 2h包被模式,则应给酶标板编码,保证每块板子的包被时间一致。
 
ELISA实验
       二、洗板
 
  1、包被后要进行两次洗涤,250微升/孔,洗涤完毕后,应在毛巾上拍干参与液体,并及时进行下一步封闭。
 
  2、 洗涤时要注意查看水流是否一致,在洗涤程中若出现任何小问题,都应将此块板做出记号,以便后期组装入库时淘汰。
 
  三、封闭
 
  1、封闭液应提前一小时取出初步回温,用前摇匀,每孔取180 mL加入酶标板,盖好盖板膜,37℃封闭 1.5h, 酶标板之间的间距应保持一致(一般为5cm)。根据培养箱的设计调节酶标板间的间距,如培养箱从底部产热,则应增加下层酶标板间的间距为10cm 。
 
  2、封闭加样采取吸一打一的方式,应避免加在孔壁上部,若不慎滴加在孔壁上,根据该滴溶液是否应加入孔内再做判断,若应加入,则小心振荡使其落入孔底,反之则用吸水纸小心吸出,残留在枪头内的溶液不要打出 以免产生气泡。并注意不可溅出,不可产生气泡
 
  3、封闭前预吸查看枪头是否合格,水流是否一致,不一致者应更换枪头,封闭应采用枪头,每封闭一块板,应将枪头套紧,并且在包被的过程中要注意查看吸液是否一致,在封闭过程中若出现任何小问题,都应将此块板做出记号,以便后期组装入库时淘汰。
 
  四烘干装袋
 
  1、封闭完后,摔倒孔内液体,并在毛巾上拍干,接下来采取烘干或者晾干的方式彻底干燥酶标板。烘干:37 ℃倒置(不加盖板膜或用自封袋),每5块板烘干30 min,随着板子数量增多时间相应延长,如100块板,需要烘3 h,依次类推;晾干:底部铺一层干净的A4纸或者吸水纸,倒置板子,在顶层铺一层盖住避光,室温晾18-24h。
 
  2、板子干燥后,应及时装入自封袋,按照每块板1袋干燥剂的量装入,袋子外面写好板子制备日期,放入本成品库冷藏环境保存备用。
 
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