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上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

大鼠白细胞介素13ELISA检测试剂盒实验原理

点击次数:243 发布时间:2021-11-11
  试剂盒组成及试剂配制
 
  1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
 
  2. 标准品(Standard):6瓶。
 
  3. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
 
  4. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
 
  5. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
 
  7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
 
  6. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
 
  7. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
 
  8. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)
 
ELISA试剂盒实验
       实验原理
 
  用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗C3抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗C3抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的C3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
 
  标本的采集及保存
 
  1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
 
  2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
 
  3. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
 
  4. 样本处理:血清或血浆标本推荐稀释10,000倍。
 
  注:以上标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月;标本溶血会影响检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
 
  ELISA试剂盒操作注意事项:
 
  1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
 
  2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
 
  3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
 
  4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
 
  5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
 
  6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
 
  7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
 
  8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
 
  9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作
 
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